实验准备
1. 细胞染色
荧光基团选择需要考虑发射光的波谱和强度：
当染色数少时，尽量选择发射光波长间隔较宽的荧光，减少补偿
表达量低用强光，表达量高用弱光
除DAPI外，需要染半小时（DAPI在上机前染5s即可）
2. 检查鞘液（双蒸水）、废液
3. 开机流程
4. 设置通道
将实验中需要用到的通道打开，输入荧光对应的marker
上机实验
1. blank
图A. X轴：FSC-A Y轴：SSC-A 去碎片、去肿胀细胞，gate活细胞（死细胞自发光会造成假阳性）
图B. X轴：FSC-H Y轴：FSC-W 去黏连，gate单细胞（黏连细胞会造成假阳性）
注意点： 细胞上机前需要滤膜过滤，防止堵塞机器
每一次gate都要建立在父群的基础上
点击右键、属性，X轴选择符合样本，使样本点位于视图中间合适位置
原理： FSC：Forward scatter，表征细胞大小
SSC：Side scatter，表征细胞复杂程度
FSC小、位于左侧的一群为细胞碎片，活细胞中淋巴细胞FSC、SSC较小，粒细胞SSC较大
2. 单标管（以三色为例） 调补偿
例：
单标管1
图C.D.E. X轴分别为荧光1-3 Y轴分别为SSC-A、荧光1、荧光1
单标管2
图C.D.E. X轴分别为荧光1-3 Y轴分别为荧光2、SSC-A、荧光2
单标管3
图C.D.E. X轴分别为荧光1-3 Y轴分别为荧光3、荧光3、SSC-A
补偿：波谱靠近的通道会相互影响
调补偿：将单标管的阴性群与阳性群调至同一竖直线，使X轴方向不存在阳性
调补偿矩阵： 选择纵坐标-横坐标项，增大其数值
小技巧： 可以选阴性群和阳性群大约各50%的marker，偶联实验所需的各种荧光基团制成单标管，调补偿时更方便
注意： 运行后略做调整，及时开始记录
每次点击“下一个试管”后，将试管命名为marker-荧光
3. 实验管
染DAPI（1000x，一般加0.5ul），滤膜过滤，上机
运行，略做调整后记录，圈门（图F.G.H等等，根据需要)，之后每支样品管只要记录即可。
4. 结束实验
保存数据，清洗，关机，检查废液、鞘液，登记
