酵母双杂交系统解析

1. 简介

研究蛋白质之间的相互作用是当前蛋白质组学研究中的一个热点,常见的研究方法有以下多种:


蛋白质相互作用常见方法

其中酵母双杂交技术作为发现和研究在活细胞体内的蛋白质与蛋白质之间的相互作用的技术平台,在近几年来得到了广泛运用。

酵母双杂交系统是在真核模式生物酵母中进行的,研究活细胞内蛋白质相互作用,对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能够通过报告基因的表达产物敏感地检测得到,它是一种具有很高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术

酵母作为报告菌株还有以下好处

  • 酵母的转化比较容易,已有的转化方法,如LiAc转化法,能将转化效率稳定在10^4 - 10^5/ug

  • 酵母能同时容纳两种以上的质粒,从酵母中提取质粒也比较方便

  • 酵母含有可直接进行选择的标记基因和特征性的报告基因,如LacZ之类简单明了的报告基因,通过颜色反应即可验证

  • 酵母双杂交技术既可以用来研究哺乳动物基因组编码的蛋白质之间的互作,也可以用来研究高等植物基因组编码的蛋白质之间的互作。

因此,酵母双杂交技术在许多的研究领域中有着广泛的应用。

2. 原理

酵母双杂交系统的建立是基于对真核生物调控转录起始过程的认识。细胞起始基因转录需要有反式转录激活因子的参与。反式转录激活因子,例如酵母转录因子GAL4在结构上是组件式的(modular),往往由两个或两个以上结构上可以分开,功能上相互独立的结构域(domain)构成,其中有DNA结合功能域和转录激活结构域。这两个结合域将它们分开时仍分别具有功能,但不能激活转录,只有当被分开的两者通过适当的途径在空间上较为接近时,才能重新呈现完整的GAL4转录因子活性,并可激活上游激活序列的下游启动子,使启动子下游基因得到转录。

3. 步骤

共转化步骤
结合步骤
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