十、流行性感冒病毒(MDCK、m基因)
流感。甲乙丙ABC三型分别引起。
- 甲型流感病毒-流行形式，能世界性大流行。动物中广泛分布。
- 乙型-局部爆发，无动物证据。
- 丙型-散在形式、主要婴幼儿、不流行、猪也是天然宿主。
(一)病原
正黏病毒科。球形囊膜病毒、刚分离到-常见丝状体-长达数μm，单股负链RNA、分节段。
人甲流病毒<u>HA基因</u>不断点突变、HA蛋白抗原性不断漂移→不同程度流行。
甲、乙、丙分型依据:粒核蛋白NP、膜蛋白MP的不同。
甲流亚型分型依据:血凝素H(H1-16)、神经氨酸酶N(n1-9)
(二)病原分离方法
- 采取标本
鼻咽拭子or含漱液、鼻咽抽吸液、低温24h运送or-70℃冻存。<u>发病3天内</u> - 分离病毒
鸡胚or细胞培养。病毒分离-诊断金标准。
鸡胚:9~11日龄、<u>尿囊腔</u>or<u>羊膜腔</u>接种、双腔也可。
细胞:MDCK狗肾细胞、“O”相特性-鸡红细胞不凝集、查HA活性用豚鼠or人"O"型细胞。
(三)特征性基因和抗原检测
- 可用基因
编码M蛋白的m基因-流感特异基因。
m基因、np基因、mp基因-不同型别ABC的检测→RT-PCR
编码表面蛋白的HA、NA基因-不同亚型的鉴定→RT-PCR、电泳检测、基因芯片检测。 - 可用抗原
NP抗原-流感阳性、HA & NA蛋白-确定亚型
制备单克隆抗体→免疫标记方法:免疫荧光、免疫胶体金测定<u>流感蛋白</u>存在。
(四)免疫检测
特异性抗体只有抗HA的中和抗体含:IgG、IgM、SIgA。
IgM抗体结果不够理想。
IgG抗体-急性期&恢复期4倍↑确诊→抗原为H3N2、H1N1、乙型毒株。
常用<u>红细胞凝集抑制</u>测定。
十一、狂犬病毒/恐水症(弹状病毒科、外形似子弹、跨膜糖蛋白GP、快速荧光灶抑制试验 RFFIT、固定毒CVS株、BHK21细胞系)
中枢<u>神经系统</u>感染疾病。
犬、猫、野生食肉动物、食虫&吸血蝙蝠→咬、抓、舔→皮肤/黏膜破损处→神经末梢上行→中枢神经系统。
急性、进行性、几乎不可逆转的<u>脑脊髓炎</u>、恐水、近似100%死亡。
野生动物主要储存宿主、犬、猫、家畜→储存宿主&主要传染源。
(一)病原
弹状病毒科:①水疱性口炎病毒属、仅②狂犬病毒属威胁人类-典型种、③未定属-植物弹状病毒。
- 野毒/街毒--动物/病人中发现的
- 固定毒--传代后适应特定宿主
外形似子弹，一端<u>半球形</u>，一端<u>扁平</u>.
单股负链RNA
跨膜<u>糖蛋白</u>-GP，诱导中和抗体&刺激细胞免疫、是保护性抗原。GP是病毒与<u>受体结合</u>的结构&与<u>毒力直接有关</u>。
(二)病原分离方法
组织分离法or乳小白鼠分离法
- 细胞培养法分离病毒
唾液、脑脊液、皮肤、脑组织→研磨后→PBS、MEM制成30%悬液→4℃ 2000 rpm 20 mins→取上清接种已单层敏感细胞(鼠神经传代细胞、Vero、BHK21)→2%血清维持液、37℃ 5%CO2孵育4~5 d→观察特异性荧光<u>包涵体</u>判断结果。 - 乳小白鼠接种法
30%待检组织悬液→离心取上清→接种1~2日龄乳鼠脑内→负压饲养柜→可取脑继续传代→无菌取脑、-70℃/50%甘油PBS-20℃保存/研磨后脱脂牛奶-20%悬液，真空冷冻干燥长期保存。
(三)特征性基因与抗原检测
核蛋白N基因相对保守。
RT-PCR、巢式PCR、Realtime-PCR
(四)抗体检测
不形成<u>病毒血症</u>，无免疫应答反应。晚期血脑屏障破坏、刺激免疫系统大量特异性抗体。
抗体检测对临床<u>诊断意义不大</u>，只在临床晚期出现。
免疫后血清中和抗体水平(评判指标)≥0.5 IU/ml有效保护--WHO。
- 小鼠中和试验-传统
- 快速荧光灶抑制试验 RFFIT (WHO推荐)
倍比稀释灭活血清，病毒-标准固定毒CVS株、细胞-BHK21→荧光显微镜看结果→和阴性血清组荧光灶比较→荧光灶抑制≥50%的血清最高稀释倍数→为中和抗体滴度
十二、腮腺炎病毒
流行性腮腺炎病毒MuV、急性<u>呼吸道</u>传染病。
好发 儿童&青少年，无力、食欲减退、一侧or双侧腮腺肿胀、疼痛发热。
并发症:脑膜炎脑炎、睾丸炎、附睾炎、卵巢炎、胰腺炎、心肌炎
潜伏期1~3 weeks，排毒期:发病前后 1周。
疫苗接种预防MV感染唯一手段。
(一)病原
副黏病毒科副黏病毒属、单链负链RNA、仅1个血清型
具有<u>血凝</u>、<u>血溶</u>2种活性。
- 凝集鸡、豚鼠(其他啮齿类不凝)、人血红细胞，4℃(好)&37℃
- 血溶:高浓度病毒、仅37℃
脂溶剂敏感、紫外线、加热可灭活
2℃ 保存3个月、-60℃ 1年↑
(二)病原分离方法
BSC-1、Vero(常用)、MDBK、Hela、KB、WI-38均可。
细胞病变表现为<u>细胞聚集</u>&<u>退化性病变</u>，有时产生<u>融合细胞</u>&<u>嗜酸性包涵体</u>。
感染细胞能吸附<u>豚鼠红细胞</u>。
<u>成年</u>啮齿类动物对病毒不敏感。
发病早期→采集唾液、尿、脑脊髓液→接种鸡胚羊膜腔、卵黄囊、传代细胞→取羊水:血红细胞吸附试验、血凝和补体结合实验or观察细胞病变(多核细胞、细胞融合、胞浆内嗜酸性包涵体)
(三)特征性基因与抗原检测
唾液、尿、脑脊髓液→RT-PCR、核酸测序。
SH基因--分型依据、因为<u>变异程度最大</u>。
融合蛋白F--细胞融合现象主要因子。
血凝素-神经氨酸酶HN--免疫原性蛋白(HN蛋白的抗体可中和病毒感染→进行<u>被动免疫</u>)。
HN蛋白→最主要的<u>V抗原</u>--病毒颗粒抗原。
可溶性抗原--<u>S抗原</u>→NP蛋白。
(四)抗体检测
血清→补体结合实验、ELISA。
急性期IgM抗体+(1个月内未接种)or IgG抗体4倍↑--确诊
十三、风疹病毒(丙类、CRS、E1蛋白、E1基因)
急性呼吸道传染病、丙类
人-唯一宿主。发热、麻疹样皮疹、耳后&枕下淋巴结肿大。
成人症状较重:关节炎、血小板减少性紫癜、个别疹后脑炎、脑脊髓膜炎。
容易<u>垂直感染</u>:流产、死胎、先天性风疹综合征（CRS）
部分风疹病毒隐形感染者--传染源。
(一)病原
披膜病毒科风疹病毒属--唯一成员、单正链RNA
只有1个血清型，2个基因组、共10个基因型(1A1G、2A2C)
不耐热、56℃ 30 mins灭活、脂溶剂敏感、甲醛、环氧乙烷、紫外线。4℃不稳定、-70~-60℃稳定。
(二)病原分离方法
咽拭子& CRS患者脑脊液、泪液、分泌液、损伤组织。
疹前45d、疹后13d；CRS发病后数月内。
Vero、RK-13兔肾细胞、BHK-21地鼠肾，无明显CPE。
病毒标本or盲传细胞→提取核酸→核素标记探针进行分子杂交、RT-PCR→诊断病毒。
(三)特征性基因与抗原检测
E1蛋白→中和抗原决定簇&凝血活性。
E1基因的739个核苷酸→WHO鉴定型别最少序列。
(四)抗体检测
IgM抗体↑持续1个月左右，CRS可达半年。
IgG抗体可达数年数十年，育龄妇女阳性率76%98%。
免疫学方法对胎儿早期感染不能诊断，从胎儿组织中检测出病毒基因是诊断“胎儿风疹病毒感染”的主要依据。
孕妇感染早期诊断:
- IgM抗体+、近期感染
- 胎儿绒毛膜中风疹特异性抗原
- 羊水or绒毛尿囊膜→核酸分子杂交or PCR检测\羊水or绒毛膜→病毒分离鉴定
