补体旁路途径(alternative pathway)溶血(hemolysis)活性的鉴定

Alternative pathway haemolytic assays

Alternative pathway

Protocol

  1. 使用Mg2+EGTA buffer将兔红细胞洗三次。
  2. 使用Mg2+EGTA buffer将兔红细胞重悬至6X107 cells/ml。
  3. 在兔红细胞中加入人类血清至1.3%人类血清浓度,在37℃混合孵育1h。
  4. 用分光光度法测定血红蛋白释放量(405 nm),此则为溶血量。

材料

  1. 兔红细胞

  2. Veronal buffer(pH 7.3):
    0.15mM CaCl2
    141mM NaCl
    0.5mM MgCl2
    1.8mM Barbitone sodium
    3.1mM Barbituric acid

  3. Mg2+EGTA buffer:
    2.5 mM Veronal buffer (pH 7.3)
    70 mM NaCl
    140 mM glucose
    0.1% gelatin
    7 mM MgCl2
    10 mM EGTA

  4. 人类血清

参考资料

  1. Classical Pathway of Complement System
  2. Scabies Mite Inactivated Serine Protease Paralogs Inhibit the Human Complement System

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